I. सेल कल्चर फ्लास्क क्या है?
सेल कल्चर फ्लास्क एक आम लैब इंस्ट्रूमेंट है जिसका इस्तेमाल सेल कल्चर के लिए किया जाता है। यह हाई-क्वालिटी पॉलीस्टाइरीन (PS) मटीरियल से बना होता है, जिसे अल्ट्रा-प्रिसिजन मोल्ड और पूरी तरह से ऑटोमेटेड प्रोडक्शन प्रोसेस का इस्तेमाल करके बनाया जाता है। प्रोडक्ट का इस्तेमाल लैब सेल कल्चर के लिए किया जाता है; इसकी बेहतरीन ऑप्टिकल प्रॉपर्टीज़ माइक्रोस्कोपिक ऑब्ज़र्वेशन को आसान बनाती हैं, और बेहतर सेल एडहेज़न के लिए सरफेस को TC-ट्रीट किया जाता है।
II. सेल सस्पेंशन को कल्चर फ्लास्क में इनोकुलेट करना
1. सेल सस्पेंशन को मिक्स करना: ज़रूरी एक्सपेरिमेंटल कंसंट्रेशन के अनुसार सेल सस्पेंशन तैयार करें और इसे कल्चर फ्लास्क, कल्चर वेसल, या दूसरे कंटेनर में अच्छी तरह मिलाएं।
2. पिपेट या पाश्चर पिपेट का इस्तेमाल करके, सेल सस्पेंशन को धीरे-धीरे और लगातार सेल कल्चर फ्लास्क में डालें, ताकि छींटे या झाग न बनें। (मल्टीलेयर सेल कल्चर फ्लास्क के लिए, लिक्विड के एक जैसे डिस्ट्रीब्यूशन पर खास ध्यान देने की ज़रूरत है; फ्लास्क को झुकाने या घुमाने से हर लेयर में लिक्विड का एक जैसा फ्लो पक्का करने में मदद मिल सकती है।)
3. कल्चर फ्लास्क को धीरे से एक स्टेबल वर्क सरफेस पर रखें, यह पक्का करते हुए कि चिकना, फ्लैट साइड ऊपर की ओर हो और ग्रेडिएंट साइड नीचे की ओर हो (आसान हैंडलिंग के लिए स्टैकेबल डिज़ाइन)।
4. सेल कल्चर फ्लास्क को एक सही इनक्यूबेटर में रखें और सही टेम्परेचर (जैसे, 37℃), ह्यूमिडिटी, और गैस कंसंट्रेशन (जैसे, 5% CO₂) सेट करें।
5. सेल्स को कुछ समय के लिए कल्चर फ्लास्क में बढ़ने दें।
III. कल्चर मीडियम बदलना
1. पुराना कल्चर मीडियम निकालना: कल्चर मीडियम को एस्पिरेट करते समय, फ्लास्क को 45-डिग्री के एंगल पर इस तरह झुकाएं कि उसका चिकना हिस्सा आपकी तरफ हो। पुराने कल्चर मीडियम को पाश्चर पिपेट या पिपेट का इस्तेमाल करके धीरे से एस्पिरेट करें, ध्यान रखें कि चिपके हुए सेल्स न हटें। अगर कल्चर मीडियम में बहुत सारे सस्पेंडेड सेल्स या गंदगी है, तो इन गंदगी को हटाने के लिए सेल्स को एक या दो बार PBS बफर से धोएं।
2. नया कल्चर मीडियम डालना: पुराना कल्चर मीडियम निकालने के बाद, कल्चर फ्लास्क में सही मात्रा में कल्चर मीडियम डालें। चिपके हुए सेल्स पर सीधे असर से बचने के लिए कल्चर फ्लास्क की साइड वॉल से मीडियम डालें। साथ ही, नॉर्मल सेल ग्रोथ पक्का करने के लिए सेल डेंसिटी और ग्रोथ रेट के आधार पर मिलाए जाने वाले नए कल्चर मीडियम की मात्रा तय की जानी चाहिए।
IV. सेल कलेक्शन
1. पुराने कल्चर मीडियम को हटाना: सेल कल्चर फ्लास्क से पुराने कल्चर मीडियम को धीरे से निकालें, सही मात्रा में PBS बफर डालें, और बचे हुए कल्चर मीडियम को धोने के लिए धीरे से हिलाएं, यह पक्का करें कि सेल की सतह साफ हो।
2. सेल्स का डाइजेशन और खत्म होना: 2-3 मिनट के लिए डाइजेशन के लिए सही मात्रा में ट्रिप्सिन (≥3ml) डालें, फिर सीरम वाले कल्चर मीडियम से डाइजेशन खत्म करें।
3. सेल कलेक्शन: सेल सस्पेंशन को पिपेट का इस्तेमाल करके सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में ट्रांसफर करें (झाग बनने से बचाएं), और सही स्पीड (जैसे, 800 rpm) पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें ताकि सेल्स सेंट्रीफ्यूज ट्यूब के नीचे बैठ जाएं।
4. सेल प्रेसिपिटेशन का कलेक्शन: सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सेंट्रीफ्यूज ट्यूब से सुपरनैटेंट को धीरे से हटा दें (सेल प्रेसिपिटेट को न हटाएं)। सेंट्रीफ्यूज ट्यूब से सेल प्रेसिपिटेट इकट्ठा करें और एक्सपेरिमेंट के लिए ज़रूरत के हिसाब से आगे की प्रोसेसिंग करें।