सेल संस्कृति में आम अभिकर्मकों
जब पशु कोशिकाएं या ऊतक शरीर को शरीर के बाहर सुसंस्कृत करने के लिए छोड़ देते हैं, तो उन्हें विकास के लिए आवश्यक विभिन्न पोषक तत्व और इन विट्रो में बेहतर कोशिका वृद्धि के लिए आवश्यक विभिन्न अभिकर्मक प्रदान करना आवश्यक होता है। इस अंक में, मैं संक्षेप में सेल कल्चर प्रक्रिया में उपयोग किए जाने वाले कुछ अभिकर्मक घटकों और उनके कार्यों का परिचय दूंगा।
1. सेल कल्चर मध्यम संरचना
(1) बुनियादी संस्कृति माध्यम
सामान्य बेसल मीडिया में मुख्य रूप से एमईएम, डीएमईएम और आरपीएमआई शामिल हैं, जो मुख्य रूप से ग्लूकोज, अमीनो एसिड, पानी, ट्रेस तत्वों और सोडियम बाइकार्बोनेट सहित बफर सिस्टम प्रदान करते हैं।
● ग्लूटामाइन
यह कोशिका वृद्धि के लिए आवश्यक एक आवश्यक अमीनो एसिड है और प्रोटीन संश्लेषण और न्यूक्लिक एसिड चयापचय में भाग लेता है।
● फिनोल लाल सूचक
आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला एसिड-बेस इंडिकेटर, यह अम्लीय होने पर पीला, तटस्थ होने पर लाल और क्षारीय होने पर बैंगनी दिखाता है। माध्यम में पीएच मान के संकेतक के रूप में फिनोल लाल का उपयोग किया जाता है।
● कार्बोनेट/PH बफर सिस्टम
एक शारीरिक पीएच बफरिंग सिस्टम। सेल चयापचय के दौरान एसिड उत्पादन के कारण, माध्यम में HCO3- का धीरे-धीरे उपभोग किया जाएगा, इसलिए एक निश्चित सीमा के भीतर पीएच को बनाए रखने के लिए CO2 को समय पर फिर से भरने की आवश्यकता होती है।
(2) पशु सीरम
पूर्ण माध्यम बनाने के लिए बेसल माध्यम में 2%-20% सीरम जोड़ें। सीरम न केवल कोशिकाओं को विकास के लिए आवश्यक बुनियादी पोषक तत्व प्रदान कर सकता है, बल्कि कोशिका चयापचय में शामिल महत्वपूर्ण घटक जैसे विकास कारक, हार्मोन, ट्रेस तत्व और आयन भी शामिल कर सकता है।
(3)। एंटीबायोटिक दवाओं
संस्कृति प्रक्रिया के दौरान कोशिकाओं को दूषित होने से बचाने के लिए, एक पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन मिश्रण को आमतौर पर पूर्ण माध्यम में जोड़ा जाता है, जो कि एक डबल एंटीबॉडी है। पेनिसिलिन ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया के खिलाफ मुख्य रूप से प्रभावी है, और स्ट्रेप्टोमाइसिन कई ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरिया के खिलाफ प्रभावी है। .
2. ट्रिप्सिन-ईडीटीए
ट्रिप्सिन कोशिकाओं के बीच प्रोटीन को हाइड्रोलाइज कर सकता है और फिर कोशिकाओं को अलग कर सकता है। EDTA कम विषाक्तता वाला एक रासायनिक चेलेटिंग एजेंट है और इसका अनुयाई कोशिकाओं पर पृथक प्रभाव पड़ता है। जब दोनों का संयोजन में उपयोग किया जाता है, तो फैलाने वाली कोशिकाओं की दक्षता अधिक होती है। इस चरण को पाचन कोशिकाएं कहा जाता है। विभिन्न कोशिकाओं के लिए, उपयोग किए जाने पर ट्रिप्सिन के तापमान, समय और एकाग्रता के लिए अलग-अलग आवश्यकताएं होती हैं। यदि पाचन अपर्याप्त है, तो कोशिकाओं को पचाया नहीं जा सकता है, और अत्यधिक पाचन से कोशिका क्षति हो सकती है। चूंकि माध्यम में सीरम ट्रिप्सिन की गतिविधि को कम कर सकता है, इसलिए पूर्ण माध्यम का उपयोग आमतौर पर कोशिका पाचन को समाप्त करने के लिए किया जाता है।
3. पीबीएस बफर
पीबीएस नमक संतुलन और समायोज्य पीएच बफरिंग प्रभाव के साथ फॉस्फेट-बफर खारा समाधान है। यह आमतौर पर कोशिकाओं को धोने और सेल आसमाटिक दबाव बनाए रखने के लिए उपयोग किया जाता है।
4. डाइमिथाइल सल्फॉक्साइड (DMSO)
एक महत्वपूर्ण मर्मज्ञ सेल रक्षक, और सेल क्रायोप्रिजर्वेशन द्रव में एक महत्वपूर्ण घटक। कोशिकाओं की क्रायोप्रेज़र्वेशन प्रक्रिया के दौरान, DMSO जल्दी से कोशिका झिल्ली में प्रवेश कर सकता है और कोशिका में प्रवेश कर सकता है, हिमांक को कम कर सकता है, हिमांक प्रक्रिया में देरी कर सकता है, कोशिका में आयन सांद्रता बढ़ा सकता है, कोशिका में बर्फ के क्रिस्टल का निर्माण कम कर सकता है और कोशिका को कम कर सकता है। आघात।
5. माइकोप्लाज्मा अवरोधक
माइकोप्लाज्मा संदूषण सेल संस्कृति प्रक्रिया में संदूषण का एक सामान्य स्रोत है। हालांकि, माइकोप्लाज्मा अवरोधकों का उपयोग संदूषण के प्रारंभिक चरण में कोशिका द्रव में माइकोप्लाज्मा को खत्म करने के लिए किया जा सकता है, ताकि प्रयोग जारी रह सके।
6. ट्रिपैन ब्लू डाई
कोशिका झिल्ली अखंडता का पता लगाने के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला एक जैविक धुंधला अभिकर्मक। कोशिका झिल्ली की अखंडता के नुकसान और पारगम्यता में वृद्धि के कारण, मृत कोशिकाओं को ट्रिपैन ब्लू द्वारा नीला दाग दिया जा सकता है, जबकि जीवित कोशिकाओं को दाग नहीं लगाया जाएगा क्योंकि उनके पास बरकरार कोशिका झिल्ली होती है जो सेल में प्रवेश करने से ट्रिपैन ब्लू को बाहर कर सकती है। जीवित और मृत कोशिकाओं को माइक्रोस्कोप के नीचे सेल रंग से अलग किया जा सकता है, जो लाइव सेल काउंटिंग के लिए सुविधाजनक है।